Test ràpid d'adenovirus-secreció nasal

Ús previst:

El kit de prova d'àcid nucleic SARS-CoV-2 s'aplica a la detecció qualitativa de l'àcid nucleic de COVID-19 en hisops nasofaríngs, orofaríngs i esputo. Els resultats de les proves proporcionen una base de diagnòstic molecular per a la infecció o els pacients sospitosos, i no s'han d'utilitzar com a criteri únic per al diagnòstic clínic.

Materials:

Procediment de prova:

A. Preparació de la mostra

L'ARN extret és el material de partida per al kit de prova d'àcid nucleic SARS-CoV-2.

Important: Cada procediment d'extracció d'àcid nucleic s'ha de realitzar simultàniament amb un control positiu (40 μL, diluir amb solucions salines estèrils/PBS al volum desitjat) i un control negatiu (40 μL, diluir amb solucions salines estèrils/PBS al volum desitjat).

Es recomana utilitzar els kits comercials d'extracció d'àcids nucleics següents: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Kit de mini ARN viral (QIAGEN); Kit TIANamp Hi-DNA/RNA (TIANGEN);

B. Configuració de la barreja de reacció

1. Tots els reactius i mostres s'han de descongelar completament, barrejar-los completament i centrifugar-se breument a temperatura ambient (interval aproximat de 18 a 25 graus) abans de l'ús.

2. Prepareu el volum necessari de la mescla de reacció en un tub de microcentrífuga de polipropilè de la mida adequada.

3. Pipeteu 25 µL de la mescla de reacció a cada pou necessari d'una placa de reacció 96-òptica adequada o un tub de reacció òptic adequat.

C. Addició de plantilla

1. Afegiu 5 μL d'ARN extret de les mostres/control positiu/control negatiu. El volum total és de 30 μL.

2. Barregeu bé les mostres i els controls amb la barreja de reacció pipetant amunt i avall/Vortex.

3. Tanqueu la 96-placa de reacció del pou amb les tapes adequades o la pel·lícula adhesiva òptica i els tubs de reacció amb les tapes adequades.

4. Centrifugueu la placa de reacció del 96-pou en una centrífuga amb un rotor de placa de microtitulació durant 30 segons a aproximadament 2500 rpm.

D. Programació de l'instrument de PCR en temps real

Per obtenir informació bàsica sobre la configuració i programació dels diferents instruments de PCR en temps real, consulteu el manual d'usuari de l'instrument corresponent. L'assaig s'ha optimitzat per al sistema de PCR en temps real ABI7500. L'execució de PCR es realitza amb condicions de ciclisme tal com es descriu a la taula següent.

Definir els detectors de fluorescència

* Si us plau, configureu la referència interna de fluorescència de l'instrument a "Cap", per exemple: per als instruments de la sèrie ABI, establiu "Referència passiva" a "Cap".

E. Anàlisi de dades

Si us plau, configureu els paràmetres d'anàlisi i analitzeu les dades segons les instruccions d'operació dels instruments pertinents.

Prengui ABI 7500 com a exemple:

La línia de base s'hauria d'establir en un rang que elimini la fluorescència de fons que es troba en els primers cicles d'amplificació, però que no se solapa amb l'àrea on els senyals d'amplificació pugen per sobre del fons (valor inicial: 3~10; valor final: {{2} }). El llindar del cicle (Ct) hauria d'estar a la base de la fase exponencial. Feu clic a "Anàlisi" per obtenir el resultat de l'anàlisi automàticament i llegiu el resultat de la detecció a la finestra "Informe".

Etiquetes populars: adenovirus prova ràpida de secreció nasal, Xina, proveïdors, fabricants, fàbrica, a granel